ELISA法手工測定的影響因素

      ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點，并具有操作簡便、無放射性危害的優點，因而多年來廣泛應用于血站和醫院的實驗室中，但在測定中常會出現一些誤差和問題。我們通過幾年的實驗觀察，認為影響結果的因素有如下方面。

1  試劑盒

        （1）抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價降低或失活，結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質的反應靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性。

       （2）酶結合物濃度過高，也會導致OD值假性增高。

2  試驗儀器

      （1）加樣器是否經過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精確，會使結果忽高忽低。

      （2）每次洗板前，應檢查洗板機針孔有無堵塞。

3  操作

    （1）檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結果假性降低。

    （2）加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實驗結果的準確性。

    （3）洗滌不充分，會使結果假性增高，過分洗滌呈假陰性。

    （4）比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應將板底擦干后進行比色，水汽或孔內氣泡也會使OD值升高。

    （5）抗原與抗體反應達到*平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低于4℃，影響反應速度。總之，由于ELISA實驗的影響因素較多，在實際工作中必須操作規范、仔細，避免和排除各種因素的影響，使之得到準確可靠的檢驗結果。